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引物设计:根据客户需求(对连续区段,外显子靶标以及客户位点),基于超高重PCR的扩增子捕获测序,利用上海翼和生物自主开发的引物设计软件,设计特异性捕获引物。
引物优化:利用多重PCR引物优化技术,使扩增子间均一性好,保证每个扩增子间拷贝数差异控制在平均深度的5~10倍以内(利用ABI 7900定量PCR检测多重PCR产物,根据ct值判读产物浓度,确保产物间的均一性),90%扩增子reads数大于15,不浪费测序通量。
试剂盒组成:试剂盒包含包含从扩增到建库到测序前纯化所用到的所有内容,购买一个试剂盒即可完成整个建库过程。
试剂盒内容组成
| 序列 | 内容 |
| 1 | Hi -Primers建库试剂盒操作说明书 |
| 2 | 引物序列信息 |
| 3 | 定量PCR质检报告 |
| 4 | 特异性捕获引物Mix(提供1000 Sample预混引物) |
| 5 | 上下游标签引物 |
| 6 | 阴性/阳性对照DNA |
| 7 | PCR扩增反应体系 |
试剂盒参数
| 试剂盒参数 |
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| DNA样本 | DNA浓度15ng/ul,浓度5-15ng/ul需提前说明 |
| 均一性 | 95%扩增子测序深度在0.2X平均测序深度以上 |
| 覆盖度 | 100X平均测序深度,100%扩增子覆盖 |
| 适用平台 | Illumina Hiseq2500,Miseq,X10等主流测序平台 |
| 平均扩增子长度 | 约200bp(游离DNA<150bp) |
| 翼和特色 | 内容 |
| 定量PCR质控结果 |
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| 覆盖度均一性 |
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