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操作步骤
使用前请先在去蛋白液RD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上标签。
1. 取植物组织加入液氮充分研磨,称取植物新鲜组织约100 mg或干重组织约30 mg。
2. 向研磨好的粉末中迅速加入400 µl缓冲液GPS和10 µl RNase A(10 mg/ml),迅速涡旋
混匀后,将离心管放在65 ℃水浴15 min,水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。
注意:若裂解后溶液粘稠,可以适量加大GPS使用量,同时在步骤3中增加缓冲液GPA的
使用量,最终GPS和GPA的体积比为4:1。
3. 加入100 µl缓冲液GPA,涡旋振荡1 min,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心5 min,转移
上清至过滤柱CS中(过滤柱CS放在收集管中),然后12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1
min ,转移滤液至新的离心管中。
注意:若裂解后溶液粘稠,加入缓冲液GPA涡旋混匀后将离心管置于冰上静置5min,然
后再离心。
4. 加入等体积的无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。
5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都转移到RNase-Free吸附柱CR2中(吸附柱CR2放在收集
管中),12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,倒掉废液,RNase-Free吸附柱CR2放入
收集管中。
6. 向RNase-Free吸附柱CR2中加入550 μl去蛋白液RD(使用前请先检查是否已加入无水乙
醇),12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,倒掉废液,将RNase-Free吸附柱CR2放入
收集管中。
7. 向RNase-Free吸附柱CR2中加入700 μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙
醇),12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 min,倒掉废液,将RNase-Free吸附柱CR2放入
收集管中。
8. 重复步骤7。
9. 将RNase-Free吸附柱CR2放回收集管中,12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2 min,弃收集
管,然后将RNase-Free吸附柱CR2转移到新的离心管中,室温晾干5-10 min。
注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥
太长时间,以免难以洗脱DNA。
10. 在RNase-Free吸附柱CR2中加入50-100 μl洗脱缓冲液TB,室温放置3-5 min, 12,000
rpm (~13,400×g ) 离心2 min,将溶液收集到离心管中。