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环境样品通用 DNA/RNA 提取试剂盒说明书
Highlights
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可从粪便，土壤，水样，生物膜，拭子，唾液，生物体液中快速提取到高纯度的 DNA/RNA(含 micro RNA)。
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该产品创新的裂解体系可以裂解格兰仕阳性菌，阴性菌，原生生物，藻类，真菌，病毒。
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获得的 DNA/RNA，产量高、纯度好，可以直接用高通量测序等下游分子生物学实验。
试剂盒组成
保存
50 次
裂解管
室温
50 个
核酸保护剂
室温
50 ml
DNA/RNA 裂解液
室温
50 ml
DNA/RNA 预洗液
室温
2X25 ml
DNA/RNA 洗涤液
室温
2X24 ml
抑制物去除液
室温
3X30 ml
DNase/RNase Free Water
室温
30 ml
DNase I(选配)
-20℃
1 管
DNA 消化液(选配)
室温
4 ml
抑制物去除柱
室温
100 个
3 号柱 Y(黄色)
室温
50 个
3 号柱 G(绿色)
收集管（2ml）
室温
50 个
室温
300 个
Note –售出后一年内产品质量是可以保证。 试剂已经过大量的常规检测来保证其可操作性。此产品仅供研究并且需要由专业人员来使用。
试剂盒中的部分试剂是有刺激性的。 请带好手套和防护眼镜。
特性:
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样品：可有效的从 200mg 以内的哺乳动物粪便，250mg 以内土壤，200mg 以内植物/种子和 50-100mg（湿
重）的真菌细菌细胞, 生物膜和水样中有效的提取到细菌，真菌，原生生物，病毒，线粒体和宿主 RNA，
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纯度: 获得的 DNA/RNA 产量高、纯度好，A260/A280＞1.8， A260/A230＞1.8，提供 DNase I 去除痕量的
DNA，得到的 DNA/RNA 可应用于高通量测序等各种分子生物学实验。
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大小:可回收到 DNA 和≥17 核苷酸的 RNA。
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产量：3 号 G 的最大结合能力为 100μg
试剂制备
DNA/RNA 洗涤液 在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记！！！
需要添加 96ml100%的乙醇（或 104ml95%乙醇）到 24ml 的 DNA/RNA 洗涤液 中
溶解冻干粉状态的DNase I需要按照管子上的量添加 RNase-free H2O
一般250U的DNase I 需要添加275μl的DNase/RNase-free H2O,终浓度为1U/μl
操作步骤:
整个操作步骤是由2个步骤组成：（I）样品裂解匀浆（I I） 核酸纯化
（I）样品裂解匀浆
以下离心步骤均在 10,000-16,000 x g 下室温（20-30℃）离心 30 秒，如无特殊说明。
1．直接添加样品到裂解管中，然后添加 750μl 的核酸保护剂到裂解管中，拧紧盖子防止泄漏，如果样品已经保存
在添加了核酸保护剂的耗材中，则直接进行第二步。
2．在涡旋仪上最大速下振荡 5 分钟混匀。（如果使用高频振荡器时间可以适当缩短）
3．离心裂解管 1 分钟
环境样品通用 DNA/RNA 提取试剂盒
Catalog No. TR202-50 (50 次反应)
Highlights
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可从粪便，土壤，水样，生物膜，拭子，唾液，生物体液中快速提取到高纯度的 DNA/RNA(含 micro RNA)。
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该产品创新的裂解体系可以裂解格兰仕阳性菌，阴性菌，原生生物，藻类，真菌，病毒。
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获得的 DNA/RNA，产量高、纯度好，可以直接用高通量测序等下游分子生物学实验。
产品组成:
试剂盒组成
保存
50 次
裂解管
室温
50 个
核酸保护剂
室温
50 ml
DNA/RNA 裂解液
室温
50 ml
DNA/RNA 预洗液
室温
2X25 ml
DNA/RNA 洗涤液
室温
2X24 ml
抑制物去除液
室温
3X30 ml
DNase/RNase Free Water
室温
30 ml
DNase I(选配)
-20℃
1 管
DNA 消化液(选配)
室温
4 ml
抑制物去除柱
室温
100 个
3 号柱 Y(黄色)
室温
50 个
3 号柱 G(绿色)
收集管（2ml）
室温
50 个
室温
300 个
Note –售出后一年内产品质量是可以保证。 试剂已经过大量的常规检测来保证其可操作性。此产品仅供研究并且需要由专业人员来使用。
试剂盒中的部分试剂是有刺激性的。 请带好手套和防护眼镜。
特性:
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样品：可有效的从 200mg 以内的哺乳动物粪便，250mg 以内土壤，200mg 以内植物/种子和 50-100mg（湿
重）的真菌细菌细胞, 生物膜和水样中有效的提取到细菌，真菌，原生生物，病毒，线粒体和宿主 RNA，
?
纯度: 获得的 DNA/RNA 产量高、纯度好，A260/A280＞1.8， A260/A230＞1.8，提供 DNase I 去除痕量的
DNA，得到的 DNA/RNA 可应用于高通量测序等各种分子生物学实验。
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大小:可回收到 DNA 和≥17 核苷酸的 RNA。
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试剂制备
DNA/RNA 洗涤液 在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记！！！
需要添加 96ml100%的乙醇（或 104ml95%乙醇）到 24ml 的 DNA/RNA 洗涤液 中
溶解冻干粉状态的DNase I需要按照管子上的量添加 RNase-free H2O
一般250U的DNase I 需要添加275μl的DNase/RNase-free H2O,终浓度为1U/μl
操作步骤:
整个操作步骤是由2个步骤组成：（I）样品裂解匀浆（I I） 核酸纯化
（I）样品裂解匀浆
以下离心步骤均在 10,000-16,000 x g 下室温（20-30℃）离心 30 秒，如无特殊说明。
1．直接添加样品到裂解管中，然后添加 750μl 的核酸保护剂到裂解管中，拧紧盖子防止泄漏，如果样品已经保存
在添加了核酸保护剂的耗材中，则直接进行第二步。
2．在涡旋仪上最大速下振荡 5 分钟混匀。（如果使用高频振荡器时间可以适当缩短）
3．离心裂解管 1 分钟。
样品类型
最大输入量
粪便
200mg
土壤
250mg
植物/种子
200 mg
液体样品
250μl
细胞（重悬在核酸保护剂中
或PBS等液体内）
50-100 mg
（2x109细菌，2x108酵母细胞，2x107哺
乳动物细胞动物细胞）
样本保存液配套产品
4．将上一步所得上清（最多 400μl）加到一个干净的 RNase-free 的离心管里。
5．直接添加 2 倍体积的 DNA/RNA 裂解液（~800μl）到离心管里混匀。
（I I） 核酸纯化
以下离心步骤均在 10,000-16,000 x g 下室温（20-30℃）离心 30 秒，如无特殊说明。
针对不同的目的采用方案 A 或方案 B 进行样品纯化。
方案 A 总核酸（DNA 和 RNA）纯化步骤
1. 添加等体积的乙醇（95%-100%）~1200μl 混匀。
2. 将上述混合物放入套在收集管上的3号柱Y（黄色）里，离心。去除滤出液。
3. 添加400μl的DNA/RNA预洗液到3号柱Y（黄色）里，离心。去除滤出液。
4. 添加400μl的DNA/RNA洗涤液到3号柱Y（黄色）里，离心。去除滤出液。将柱子放入一个干净的1.5ml离心管
内。
5. 在吸附膜的中间部位加100μl RNase-free 水，静置5分钟，离心洗脱粗提的总核酸（DNA和RNA）。
6. 添加2倍体积（~200μl）的DNA/RNA裂解液到粗提的总核酸中，混匀。
7. 添加等体积的乙醇（95%-100%）~300μl，混匀。
8. 将混合物添加到一个放入套在收集管上的3号柱G里，离心。去除滤出液。
9. 添加400μl的DNA/RNA预洗液到3号柱G（绿色）里，离心。去除滤出液。
10. 添加700μl的DNA/RNA洗涤液到3号柱G（绿色）里，离心。去除滤出液。
11. 添加400μl的DNA/RNA洗涤液到3号柱G（绿色）里，离心2分钟*去除洗涤液残留。
12. 取出3号柱G，放入一个无RNA酶的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl RNase-free 水，静置5分钟，离
心洗脱总核酸（DNA和RNA）.
13. 将抑制物去除柱套在一个收集管内，添加600μl的抑制物去除液，在≥8,000 x g下离心3分钟。
14. 将洗脱的总核酸放入制备好的抑制物去除柱内，抑制物去除柱套在一个干净的1.5ml离心管内， 并在16,000
x g下离心3分钟，得到的总核酸可进行后续试验。
方案 B DNA 或 RNA 分别纯化步骤
1. 将上述混合物~1200μl放入套在收集管上的3号柱Y（黄色）里，离心。保存滤出液用于RNA提取。保存柱子
用于DNA提取。
DNA提取
RNA提取
2. 将3号柱Y（黄色）套在一个新的收集管。
2. 添加等体积的乙醇（95%-100%）~1200μl 混
匀。将上述混合物放入套在收集管上的 3 号柱
G(绿色)里，柱子的最大承载体积是 700μl，反
复离心。去除滤出液。
（此步骤之后可选做DNase I 处理）
3. 添加400μl的DNA/RNA预洗液到柱里，离心。去除滤出液。
4. 添加700μl的DNA/RNA洗涤液到柱里，离心。去除滤出液。
5. 添加400μl的DNA/RNA洗涤液到柱里，离心。去除滤出液。将柱子放入一个干净的1.5ml离心管内。
6. 在吸附膜的中间部位加100μl RNase-free 水，静置5分钟，离心洗脱DNA或RNA。
7. 将抑制物去除柱套在一个收集管内，添加600μl的抑制物去除液，在≥8,000 x g下离心3分钟。
8. 将洗脱的DNA或RNA放入制备好的抑制物去除柱内，抑制物去除柱套在一个干净的1.5ml离心管内，并在
16,000 x g下离心3分钟，得到的总核酸可进行后续试验。
DNase I处理（选做）
1. 在RNA提取第2步后，添加400μl的DNA/RNA洗涤液到柱里，离心。去除滤出液。
2. 针对每一次提取 配置 80μl的DNase I反应体系（75μl 的DNA消化液和5μl的DNase I溶液）。
3. 添加80μl 的DNase I体系到柱基质上，然后在室温下（20-30℃）孵育15分钟。然后进行下面的步骤完成RNA
的提取。
关键词：
环境样品通用
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