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通用微生物 RNA 小量提取试剂盒说明书
通用微生物 RNA 小量提取试剂盒
Catalog No. TR430-50 (50 次反应)
TR430-50N (50 次反应 不含 DNase I )
Highlights
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可从环境样品中（如粪便，土壤，水样，生物膜，拭子，唾液等）提取到无抑制物的 RNA（含 microRNA）。
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创新的裂解体系可有效的裂解格兰仕阳性/阴性菌，细菌，真菌，藻类，病毒。
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获得的 RNA 产量高、纯度好，可以直接用于酶切、PCR、芯片，高通量测序等分子生物学实验。
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此产品仅供科研使用。
产品组成:
试剂盒组成
保存
50 次
裂解管
室温
50 个
核酸保护剂
室温
50 ml
RNA 裂解液
室温
50 ml
RNA 预洗液
室温
2X25 ml
RNA 洗涤液
室温
24 ml
RNase-free H2O
室温
30 ml
抑制物去除剂
室温
30 ml
DNase I
室温
1 管
DNA 消化液
室温
4 ml
3 号柱 G
室温
100 个
抑制物去除柱
室温
50 个
收集管（2ml）
室温
150 个
Note –售出后一年内产品质量是可以保证。 试剂已经过大量的常规检测来保证其可操作性。此产品仅供研究并且需要由专业人员来使用。
试剂盒中的部分试剂是有刺激性的。 请带好手套和防护眼镜。
特性:
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样品：可有效的从 200mg 以内的哺乳动物粪便，250mg 以内的土壤，200mg 以内的植物/种子，50-100mg 以
内的真菌细菌细胞，生物膜，水和拭子等样品中提取到总 RNA.
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保存：核酸保护剂可有效的裂解细胞，灭活核酸酶和各种传染样品，并且对于在常温下运输和保存样品是一种
非常理想的试剂。
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RNA 纯度: 获得的 RNA 产量高、纯度好， 可以直接用 PCR，高通量测序等各种分子生物学实验。回收的
RNA 里可能会有微量的 DNA 残留，根据下游实验，如要*去除可用 DNase I 采用柱上消化方法。
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RNA 大小: 回收到的 RNA≥17 核苷酸。
? 所需设备：台式离心机，涡旋振荡器，细胞破碎仪（推荐）
试剂制备
RNA 洗涤液 添加 96ml100%无水乙醇（或 104ml95%无水乙醇）到 24ml 的 RNA 洗涤液 中并做好标记。
DNase I 添加275µl RNase-free H2O到冻干粉状的DNase I管中混匀，DNase I终浓度1U/µl,放在-20℃保存。
操作步骤:
RNA提取步骤包含2个步骤（I）样品制备 (II) RNA纯化
样品制备:
以下离心步骤的离心力均在10,000-16,000 x g下进行，除非特殊说明。
1.
直接添加样品到裂解管中，然后添加 750µl 的核酸保护剂到裂解管中，拧紧盖子，在涡旋仪上振荡 5 分钟以内混
匀，。（如果使用高频振荡器时间可以适当缩短，如果使用低频振荡器时间可以适当延长到 20 分钟。）
样品类型
最大输入量
粪便
200 mg
土壤
250 mg
植物/种子
200 mg
液体样品和口腔拭子
250 μl
细胞（悬浮在保护剂中或者
PBS 等等渗
溶液中）
50-100 mg(湿重)
（109细菌，108酵母细胞，107哺乳动物细胞）
保护剂系列的收集套装
750μl
2.
将裂解管离心 1 分钟。
3.
将上述步骤中 400μl 上清加到一个干净的 RNase-free 离心管中。然后进行下面的 RNA 纯化步骤。
RNA纯化:
以下离心步骤的离心力均在10,000-16,000 x g下离心1分钟，除非特殊说明。
1.
添加2倍体积的RNA裂解液(~800μl)到管子中混匀。
2.
添加等体积的 95-100%无水乙醇 (~1200μl)到上述溶液中混匀。
3.
将上述混合液添加 3 号柱 G 中，3 号柱 G 套在一个收集管内，离心，去除滤出液。(液体体积超过 800μl 需要反
复装填离心)
4.
添加 400μl RNA 预洗液到柱子中，离心。去除滤出液。
5.
添加 400μl RNA 洗涤液到柱子中，离心。将 3 号柱 G 套在一个干净的无 RNase 的离心管中。
6.
直接添加 85μl RNase-free H2O 到 3 号柱 G 基质上，离心。丢弃 3 号柱 G。
7.
添加 10μl DNA 消化液和 5μl DNase I 溶液到离心管中，混匀。在室温（20-30℃）下孵育 15 分钟。
8.
添加2倍体积的RNA裂解液（~200μl）到离心管中混匀。
9.
添加等体积的 95-100%无水乙醇 (~300μl)到上述溶液中中混匀。
10. 将上述混合液添加到一个新的 3 号柱 G 中，3 号柱 G 套在一个收集管内，离心，去除滤出液。
11. 添加 400μl RNA 预洗液到柱子中，离心。去除滤出液。
12. 添加 700μl 的 RNA 洗涤液到柱子里，离心。去除滤出液。
13. 添加 400μl 的 RNA 洗涤液到柱子里离心 2 分钟以*去除乙醇，以免抑制下游反应。将 3 号柱 G 套在一个干净
的无 RNase 的离心管内。
14. 在吸附膜的中间部位加 100μl RNase-free H2O 离心。（如要提取到高浓度的 RNA 可以添加 50μl）
15. 将抑制物去除柱套在一个新的收集管内，添加600μl的抑制物去除液，在≥8,000 x g下离心3分钟。
16. 把洗脱的RNA（步骤14）放入制备好的抑制物去除柱内，将抑制物去除柱套在一个干净的无RNase的离心管内
并在16,000 x g下离心3分钟，得到的RNA可进行后续试验或放在-80℃以下保存。
关键词：
RNA
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