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各类小鼠组织巨噬细胞分离与表型分析实验中，F4/80 抗体是专属巨噬细胞谱系标记试剂，F4/80 抗原又称 Adgre1，特异性表达于小鼠所有组织驻留巨噬细胞表面，结合 Elabscience Elab Fluor Violet 450 标记F4/80抗体，完整梳理该抗体实验应用、样本制备与长期保存方法。
这款 F4/80 抗体克隆编号为 CI:A3-1，宿主为大鼠，仅与小鼠样本抗原发生特异性结合，偶联紫色系列荧光染料，适配流式 405nm 激光器通道，可与 FITC、APC 等不同波长荧光抗体组合搭建多色检测方案，区分巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞三类易混淆髓系免疫细胞。巨噬细胞样本来源包含腹腔冲洗液、肝脏、脾脏、肺组织，实体组织样本需要轻柔研磨过筛，避免机械剪切破坏细胞膜表面 F4/80 抗原，研磨力度过大会导致 F4/80 抗原脱落，F4/80 抗体无法正常结合，巨噬细胞阳性比例偏低。
染色操作前 Fc 封闭步骤不可省略，小鼠巨噬细胞高表达 Fc 受体，未封闭样本会出现大范围非特异性荧光，干扰巨噬细胞群分群效果。F4/80 为膜表面抗原，常规流式表面染色无需破膜处理，若实验同步检测巨噬细胞胞内极化因子，可采用低浓度多聚甲醛短时间固定，高浓度固定剂会遮蔽 F4/80 抗体识别的胞外表位。孵育全程保持 4 摄氏度避光环境，紫色荧光染料光稳定性弱于绿光染料，操作过程缩短开盖见光时长。
试剂养护遵循通用流式抗体标准，2 至 8 摄氏度冷藏，严禁冷冻，冰袋运输抵达实验室后立即转入冰箱，十二个月有效期内使用完毕，配套同型对照试剂与 F4/80 抗体同步存放，每次实验同步设置对照管用于扣除自发荧光。伊莱瑞特针对小鼠髓系细胞搭建完整抗体矩阵，除 F4/80 外，同步提供 CD11b、CD86、CD206 等极化标记荧光抗体，便于巨噬细胞 M1/M2 极化联合检测。
上机数据分析阶段，先利用散射光排除细胞碎片与粒细胞，再通过 F4/80 阳性信号单独圈出巨噬细胞群体，后续叠加极化标志物统计细胞亚群占比。长期闲置的 F4/80 抗体建议分装为小体积，降低反复开盖带来的光照损耗，定期使用标准腹腔巨噬细胞复测荧光信号，保证后续组织样本检测结果稳定，为组织炎症、肿瘤相关巨噬细胞机制研究提供稳定检测工具。
关键词：
F4/80抗体
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